En una noche mágica en el Museo de Historia Natural de Nueva York, Larry Daley, el guardia nocturno más genial de la historia, descubre que la magia que da vida a las exposiciones está empezando a desvanecerse. Tras una serie de eventos peculiares y cómicos, se entera de que el secreto que mantiene todo en movimiento reside en un antiguo artefacto que no solo hizo posible la magia, sino que también necesita un “retoque” urgente.
Con la presión encima, Larry se embarca en una aventura internacional que lo lleva a Londres, donde se encuentra con una versión de su amigo imperial, el faraón Ahkmenrah, y su familia. Juntos, deben resolver el misterio que amenaza no solo la vida nocturna del museo, sino también la conexión que tienen con la historia. A medida que viajan por el icónico Museo Británico, deben lidiar con nuevos personajes, incluida la guardia nocturna de Londres, y enfrentarse a antiguos enemigos. Además de las bromas y el humor, Larry y sus amigos se enfrentan a momentos de reflexión sobre la amistad y la historia.
La película mezcla acción, comedia y un toque de fantasía, mientras los personajes, tanto humanos como figuras históricas, buscan mantener viva la chispa de la magia del museo. Entre risas y enseñanzas, nos recuerda que los recuerdos y las conexiones son lo que realmente da vida a nuestra historia.